质粒转染和慢病毒转染的区别(慢病毒质粒和普通质粒)

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应用shRNA慢病毒颗粒和shRNA质粒有什么不同?

然而

shRNA

慢病毒颗粒即刻加入各种哺乳细胞迅御,包括原代和未亩陵岩分化细胞。shRNA

质粒

shRNA

慢病毒颗粒可用嘌呤酶素使其可以稳汪迹定表达

shRNA。

质粒转染和病毒感染

随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展,转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中,其应用越来越广泛。

1. 转染的分类:物理介导、化学介导和生物介导三类途径。

物理介导:电穿孔法、显微注射和基因枪法;

化学介导:经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;

生物介导:较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。

2. 三种转染方法具体介绍:

电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入(实验条件控制较严、难度较大);

脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞(常用,质体与质粒的比例,细胞密度,转染的时间长短和培养基中血弊游裤清的含量都影租简响转染效率);

病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞(前期准备较复杂、对细胞可能有较大影响);

3.质粒:真核细胞细胞核外或原核生物拟核区外能够进行自主复制的遗传单位。

包括真核生物的细胞器(主要指线粒体和叶绿体)中和细菌细胞拟核区以外的环状脱氧核糖核酸(DNA)分子。

在基因工程中质粒常被用做基因的载体(Vector),质粒上常有抗生素的抗性基因,例如氨苄抗性基因或 卡那霉素 抗性基因等。

4.病毒转染:外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达。可用于RNAi,cDNA克隆以及报告基因的研究,稳转细胞株的筛选,为活体动物模型实验。

慢病毒载体的包装系统一般由两部分组成,即包装成分和载体成分。前者能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白;磨尘后者同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。

步骤: 1 )构建载体 2 )包装提纯病毒 3 )感染靶细胞

为产生高滴度的病毒颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞,在细胞中进行病毒的包装,包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上清液后,可以直接用于宿主细胞的感染,目的基因进入到宿主细胞之后,经过反转录,整合到基因组,从而高水平的表达效应分子。

5. 质粒转染和病毒感染异同:

(1)质粒转染:相对简单的基因传递方式,与病毒载体主动进行细胞攻击侵染方式不同,质粒转染属于被动扩散。

优点:质粒载体构建流程相对简单,速度快(病毒载体都需要先构建载体后包装成病毒颗粒)

缺点:a.在细胞水平,质粒转染效率不稳定,不同细胞依照不同的转染方法和转染介质,效率差别较大,且大部分方法效率不高;

b.质粒转染一般入核效率低,特别是阳离子脂质体,阳离子聚合物等介质,电转质粒入核的效率则比介质转高不少,但比起慢病毒转染,效率仍然低很多,且对细胞损伤较大。

(2)病毒载体转染:病毒粒子是病毒壳(介导细胞转导/引入整合酶/介导体内靶向转导)+目的基因的复合物,不用或者用简单的试剂就能完成基因导入。

优点:转染效率高,应用不同的病毒载体工具可实现细胞和动物的高效转导和稳定转导。

缺点:不同的病毒载体的包装需要比较复杂流程和工艺优化,相对技术门槛较高。

慢病毒载体 慢病毒质粒载体 质粒载体 这三个东西是什么关系?

我不知道如何说明。

按照我的理解,质粒载体是一个很模糊、宽泛的概念。所有的中小型、包含有某些功能性基因序列的、闭合环状双链DNA,都可以叫做质粒载体。用于真核细胞的,有真核质粒;用于原核的扰弊,有原核质粒。区别就在于说使用的元件的差异。我们通过质滑携粒这种DNA作为载体,来承载我们需要的基因,或是DNA片段。它没有很明确的功能方向。

慢病毒载体是一类规定了功能方向的载体,它的构建使用了慢病毒的一些元件,最终的目标是进入动物细胞体内,进行一个稳定的信李伏表达。

对于慢病毒质粒载体,我一般是把他跟慢病毒载体混用的。有好心人能告诉我他们的区别不?

质粒纯化和慢病毒纯化哪个好

都好。质粒纯化和慢病毒纯化都好。

1、首先质粒载巧腊体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的质粒。

2、其次慢病毒载体是指以人类免疫缺陷病毒-1 (H IV-1) 来源的一种病毒载体,慢病毒载体包含了包装、转染、稳定察银整合所需要的遗传信息败宽宴,是慢病毒载体系统的主要组成部分。

我想了解质粒转化、噬菌体病毒、腺病毒、慢病毒转染等基因工程方面的内容,应该看什么书

慢病毒较好些,要看你做什么实验了。 1.转染效率:慢病毒较高 2.慢病毒可以实现稳定转染,腺病毒是瞬时转染 3.包装量:慢病毒可以包装4kb左右,不超过8kb的外源基因,腺病毒可以包装8kb左右外源基因 4.慢病毒操作较方便,周期也短。但腺病毒表达快,1-2天,慢病毒要2-4天。 5.安全性:两个差不多 6.感染细胞类型:都可以感染分裂和不分裂的细胞 7.免疫拆察原性:腺病毒高免疫原差凯性,慢病毒低免疫原性旅庆茄 8.腺病毒不能得到转基因动物,慢病毒可以 9.产生的病毒滴度,腺病毒要高些

研究生一年级,老板让做一个稳转细胞系,该怎么操作??

稳转细胞系常用的方法有质粒转染和慢病毒转染进行稳定株筛选,前者操作简单,但是成功率很低,费物乎时,假阳性高,最后可能导致几个罩槐悉月的工作白干了,慢病毒稳定株筛选方明岩法比较简单,并且慢病毒本身具有稳定整合入基因组的特性,没有假阳性,慢病毒包装可能相对比质粒构建难度大,如果经费充足可以直接找公司包毒的。

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